Сифилис методом ифа

Главная » Сифилис » Сифилис методом ифа

Диагностика сифилиса: анализы и их расшифровка

Сифилис – инфекционное венерическое заболевание, вызываемое спирохетами бледной трепонемы. Пути передачи: при сексе, от матери к плоду, трансфузионно, и значительно реже — через раны на коже, которые вступают в контакт с инфекционными поражениями. В зависимости от стадии, выделяют первичный, вторичный, латентный и третичный сифилис.

Прямые способы

Микроскопия в темном поле

Бледные трепонемы не могут расти на питательных средах и не визуализируются под световым микроскопом. Так как обнаружение патогена с помощью обычной микроскопии невозможно, применяют специальный микроскоп с темным полем, где возбудитель виден в виде спирали на темном фоне.

Для проведения микроскопии забирается биоматериал с подозрительного на заболевание очага. Микроскопия в темном поле – это возможный способ оценки кожных поражений, таких как шанкр первичного сифилиса или кондилома вторичного сифилиса. Если материал макулопапулезного очага сухой, исследуют аспират лимфатического узла.

Отрицательный результат не исключает патологический процесс, статистически выявление возбудителя возможно только в 80%.

ПЦР-диагностика

Реакция, направленная на многократное увеличение ДНК бледной трепонемы, позволяет сделать вывод об инфицировании сифилисом или об его отсутствии.

Биоматериал для анализа может быть любым: кровь, содержимое сифилида, спинномозговой жидкости и пр. Тест подходит для инкубационного периода.

ПЦР полностью специфична.

Непрямые серологические анализы на сифилис: трепонемные и нетрепонемные тесты

Серологические анализы (КСР или комплекс серологических реакций) считаются наиболее распространенным способом для диагностики всех стадий сифилиса. Выделяют следующие реакции:

  • агглютинации;
  • преципитации;
  • иммунофлюоресценции;
  • иммуноферментный анализ и пр.

Также серологические анализы на сифилис подразделяют на трепонемные и нетрепонемные.

Нетрепонемные

При подозрении на приобретенный сифилис выполняют скрининговое тестирование, для чего используют нетрепонемные тесты, определяющие антитела к липоидным антигенам тканей хозяина или возбудителя в разнообразных модификациях. В РФ рутинно выполняют реакцию микропреципитации (РМП), которая позволяет выявить антитела к поврежденным патогеном клеткам в крови. Достоверность скрининга высокая, но специфичность невелика, поэтому тестирование подходит для первичного массового обследования в превентивных целях.

Чувствительность экспресс-тестов оценивается в 78-86% для выявления первичного сифилиса, 100% для вторичного сифилиса и 95-98% для выявления третичного сифилиса.

Специфичность — от 85-99%, иногда- менее, что встречается при следующих состояниях:

  • гестация;
  • менструация;
  • онкология;
  • заболевания соединительной ткани;
  • туберкулез;
  • малярия;
  • вирусные заболевания;
  • болезни печени;
  • вакцинация;
  • «свежий» ИМ;
  • сыпной тиф и пр.

Помимо этого, избыток жиров в рационе, употребление спиртосодержащих напитков и прием некоторых лекарств могут привести к ложноложительным заключениям.

Результаты скринингового тестирования становятся положительными через 1-2 недели после образования шанкра. Нетрепонемные тесты дают отрицательный ответ через некоторое время после лечения. При ВИЧ-статусе нетрепонемные антитела могут выявляться длительно, иногда на протяжении всей жизни (что подтверждается результатами соответствующего рандомизированнного исследования).

Другие разновидности нетрепонемных анализов: VDRL, плазмореагиновый тест (RPR) , проба с толуидиновым красным, реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном (РСКк).

Реакция Вассермана (RW)

Связывание комплемента – ответ иммунной системы на инфицирование, результат варьируется от отрицательного (ставится «-»), до резко положительного «++++» или 4 плюса.

В начальной стадии первичного сифилиса RW отрицательна.

Трепонемные

Из-за возможности ложноположительных результатов для подтверждения любого положительного или сомнительного результата нетрепонемного анализа, используют трепонемные тесты:

  • реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
  • гемагглютинация (РПГА),
  • иммуноферментный анализ (ИФА) для иммуноглобулинов класса G (IgG) и иммуноглобулина М (IgM);
  • иммуноблоттинг;
  • РИБТ/РИТ (реакция иммобилизации бледных трепонем).

Важно: Трепонемные тесты не используются для оценки эффективности терапии.

РИФ на определение трепонемных АТ класса IgG применяют после положительного результата экспресс-анализов (чувствительность 84% для первичного сифилиса и 100 % при других стадиях, специфичность 96%). Для диагностики врожденного сифилиса у новорожденных не применимы.

В некоторых лабораториях используют «обратные» скрининговые исследования.

CDC (Centers for Disease Control and Prevention, США) рекомендует традиционные исследования, с проверкой количественными нетрепонемными тестами, при положительном результате проводится лечение.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

На собранный материал наносят сыворотку с мечеными флюорохромом антителами, специфичными к антигену бледной трепонемы, возбудитель притягивает к себе иммунные комплексы, из-за чего начинает светиться в люминесцентном микроскопе.

Реакция пассивной гемоагглютинации или РПГА

До появления гемагглютинации (склеивания) эритроцитов с момента внедрения бледной трепонемы должно пройти не менее 4 недель.

Подготовленные эритроциты с фиксированными белковыми фракциями патогена взаимодействуют с плазмой, если есть антитела к сифилису, происходит реакция.

Подходит для подтверждения любой стадии заболевания.

Иммуноферментный анализ

В основу положена реакция антиген-антитело. Выявляются антитела различных классов, которые можно оценить количественно.

Полученные результаты позволяют судить о длительности патологического процесса, успешности проводимого лечения, иммунологическом статусе, активности возбудителей.

Иммуноблоттинг – разновидность ИФА, применяют для углубленной диагностики при всех сомнительных результатах.

Чувствительность и специфичность близка к 100%, на сегодняшний день ультрачувствительный метод идентификации белков.

РИБТ

Способ основан на реакции антиген-антитело. Антигеном служат бледные трепонемы, культивируемые в тестикулах кролика. При взаимодействии с антителами зараженного человека, патогены утрачивают подвижность. Реакция оценивается с помощью микроскопии в темном поле.

Обратите внимание: РИБТ в настоящее время применяют из-за трудоемкости реже, но анализ может быть полезен для решения спорных вопросов (ложноположительные реакции на сифилис).

Дифференциальная диагностика

Наибольшую сложность представляет диагностика третичного сифилиса, что обуславливается симптомами со стороны сердечно-сосудистой и нервной системы, а также проявлениями со стороны кожного покрова.

Пациенты обязательно должны быть обследованы на гонорею, трихомониаз, хламидиоз, бактериальный вагиноз, ВИЧ-инфекцию и гепатиты В и С.

Перечислим заболевания, с которыми проводят дифференциальную диагностику при сифилисе:

  • кандидоз;
  • мягкий шанкр;
  • инфекции мочевыводящих путей;
  • дерматологические проявления герпеса;
  • генитальные бородавки (ВПЧ);
  • донованоз;
  • ВИЧ-инфекция и СПИД;
  • венерическая лимфогранулема;
  • вирус ветряной оспы;
  • фрамбезия.

С чего начинается диагностика сифилиса

Изначально проводится беседа с пациентом, во время которой уточняются детали: когда был подозрительный половой контакт и какие есть жалобы.

После сбора анамнеза переходят к физикальному осмотру, особое внимание уделяется области гениталий и ануса, слизистым оболочкам и лимфатическим узлам. Предварительный диагноз уже может быть установлен. Окончательная верификация происходит с помощью лабораторных анализов.

Если сказать просто о сложном, то одни анализы выявляют возбудителя сифилиса, а другие отражают реакцию организма на внедрение бледной трепонемы.

Для установки окончательного диагноза РПГА следует дополнить 1 трепонемным и 1 нетрепонемным анализом.

Диагностика сифилиса у беременных

Проводятся обязательное исследование на сифилис несколько раз в течение беременности.

Направление на анализ КСР выдается во время первого визита женщины в консультацию, и за время беременности трижды выполняется обследование. Пациентки из высокой группы риска с отягощенным анамнезом: ИППП, асоциальные, зависимые и пр. требуют особенно пристального внимания.

Если результаты анализа положительные, проводят более глубокую диагностику, и по показаниям назначают лечение, которое зависит от стадии и клинических проявлений.

Диагностика врожденного сифилиса

Большинство детей с врожденным сифилисом рождаются у нелеченных матерей, либо получивших терапию слишком поздно.

Трепонемные тесты с использованием неонатальной сыворотки не рекомендуются из-за пассивного переноса антител IgG. Все дети, рожденные от матерей с сифилисом, должны обследоваться с помощью количественного нетрепонемного серологического теста (RPR или VDRL), выполненного с использованием сыворотки крови новорожденного.

Как трактовать результаты серологических исследований

Реакция микропреципитации, РИФ и РПГА отрицательны – норма, положительны – подтверждение сифилиса.

Реакция микропреципитации отрицательна, остальные положительны – сифилис в анамнезе после проведения специфической терапии, либо поздняя стадия.

Отрицательная РИФ при положительных РПГА и реакции микропреципитации – результат вызывает сомнения, повторная комплексная оценка.

Отрицательный результат РИФ и микропреципитации, но положительная РПГА – состояние после успешной антибиотикотерапии либо ложноположительный результат.

Положительная РИФ при отрицательных РПГА и реакции микропреципитации – ранняя стадия, проведенное лечение или недостоверность результата.

Положительная реакция микропреципитации, не подтвержденная ни РПГА, ни РИФ – отсутствие сифилиса.

Инструментальное исследование при сифилисе

Инструментальная диагностика проводится в зависимости от вовлеченности органов. Например, гранулематозное поражение печени можно увидеть при компьютерной томографии брюшной полости.

Рентгенография органов грудной клетки у пациентов с третичным сифилисом может показать дилатацию аорты. Линейная кальцификация по ходу аорты свидетельствует в пользу сифилитического аортита.

Ангиография может быть полезна в диагностике абдоминальной сифилитической аневризмы.

При диагностике нейросифилиса при соответствующих симптомах используют люмбальную пункцию с забором спинномозговой жидкости.

Мишина Виктория, уролог, медицинский обозреватель

Источник: https://okeydoc.ru/diagnostika-sifilisa-analizy-i-ix-rasshifrovka/

Метод диагностики сифилиса: иммуноферментный анализ крови – ИФА (положительный)

Анализ ИФА на сифилисНи для кого не является секретом, что своевременная диагностика любого заболевания означает едва ли не половину успеха его лечения. Очень важно подобрать именно те анализы, методы или способы диагностики, которые действительно помогут поставить точный диагноз, а не запутают врача еще сильнее. Иммуноферментный анализ крови давно зарекомендовал себя методом, позволяющим не только получить положительный или отрицательный ответ на вопрос – болен ли человек какой-либо половой инфекцией, но и определить, на какой стадии развития находится заболевание, а также понять, была ли подобная проблема у пациента в анамнезе. ИФА на сифилис на сегодняшний день – один из наиболее чувствительных и специфичных анализов, при этом его точность составляет около 90%.

Тест-системы, которые использует метод иммуноферментной диагностики, предназначены для выявления не только сифилиса, но и множества других инфекций: гепатит, ВИЧ, ЦМВ, герпес, токсоплазмоз и т.д. Анализ ИФА на сифилис позволяет определить антитела (IgG, IgA, IgM) к бледной трепонеме, содержащейся в крови больного человека. Этот метод позволяет увидеть взаимодействие антител со специальными препаратами, в которых заложены антигены, способные в комплексе с антителами образовать признак заболевания, хорошо заметный при различных способах диагностики.

В основе иммуноферментного анализа на сифилис лежит метод взаимодействия выявляемых в крови антител с антигеном возбудителя инфекции. Диагностика будет зависеть от того, какие именно антитела использовались: могут выявляться либо антитела определенного класса, либо в общем. Для диагностики этим методом кровь берется натощак из вены.

ИФА анализ крови на сифилис подразумевает использование трех классов иммуноглобулинов: G, M, A. Указанные иммуноглобулины имеют одно важное для диагностики сифилиса методом ИФА свойство: они вырабатываются в строго определенной последовательности, благодаря чему ИФА позволяет определить, на какой именно стадии находится процесс и какова динамика его развития:

  • Иммуноглобулин М в крови показывает, сколько времени прошло с момента заражения. Однако не всегда положительные результаты его наличия означают наличие венерического заболевания: возможно, у человека произошло обострение какой-либо хронической болезни, вызвавшее подобную реакцию.
  • Наличие антител IgA означает, что с момента заражения прошло не менее месяца.
  • Поскольку иммунитет к данному заболеванию не вырабатывается, положительный результат обследования на IgG может показывать как пик заболевания, так и период после пройденной терапии.

Что означает ИФА на сифилис положительно?

Следует отметить, что ИФА положительный на сифилис – это не повод для паники. Дело в том, что такой метод позволяет определить лишь наличие антител, но не возбудителя. Следовательно, если результат ИФА сифилис – положительно, это еще не является основанием для того, чтобы поставить диагноз. Однако в научном мире тест-системы совершенствуются ежедневно, и на сегодняшний день это означает, что в большинстве случаев результатам анализов все же можно доверять.

Результатов диагностики бывает всего два: «положительный» и «отрицательный». В первом случае положительные данные означают, что у пациента заболевание в одной из стадий, либо что он совсем недавно окончил курс лечения. Отрицательный же результат иммуноферментного исследования крови означает либо отсутствие заболевания, либо очень раннюю стадию его развития.

Источник: http://www.zppp.saharniy-diabet.com/sifilis/analizy/ifa

Сифилис: иммуноферментный метод диагностики сифилиса

Трепонемные антитела класса IgM в сыворотке крови у здоровых людей не определяются.

Из всех серологических методов диагностики сифилиса метод ИФА наиболее чувствителен (свыше 95%) и специфичен (100%). При его использовании выявляют специфические (трепонемные) антителаклассов IgM и IgG. Антитела класса IgM имеют большое значение для диагностики первичного, вторичного и врождённого сифилиса. Выявление антител IgM свидетельствует о наличии у больного первичного, вторичного или врождённого сифилиса. Антитела класса IgM выявляют в сыворотке крови со 2-й недели после заражения. В процессе лечения содержание антител класса IgM у больного снижается. По их количеству можно следить за эффективностью проводимого лечения. После успешного лечения содержание антител класса IgM снижается до отрицательных результатов. Определение антител класса IgM имеет большое значение для диагностики ранних форм врождённого сифилиса, дифференциальной диагностики рецидивов, реинфекции. Тест на определение антител IgM может быть отрицательным в некоторых случаях позднего латентного сифилиса и нейросифилиса. Определение антител IgM методом ИФА имеет очень высокую чувствительность при врождённом сифилисе (100%) и более низкую - при первичном сифилисе (82%), вторичном (60%), латентном (53%), нейросифилисе (34%) и третичном сифилисе (11%) и очень высокую специфичность.

Антитела класса IgG появляются в острый период заболевания и могут сохраняться у вылечившихся пациентов пожизненно.

Метод ИФА применяют для диагностики сифилиса, дифференцирования ложноположительных результатов, полученных в МР, контроля за эффективностью лечения.

Источник: https://ilive.com.ua/health/sifilis-immunofermentnyy-metod-diagnostiki-sifilisa_84961i15984.html

Анализ крови по методу ИФА

Image 570

Среди методов анализа крови (ссылка на 3-ю статью в этом файле), позволяющих оценить способность организма противостоять инфекционным болезням и показывающих фазу болезни, важное место занимает иммуноферментный анализ (ИФА). Проведение этого исследования позволяет всесторонне оценить деятельность защитной функции крови и выявить состояние иммунодефицита при инфекционных патологиях, также заболеваниях крови, аутоиммунных процессах, гормональных проблемах.

Каким же образом удается охватить столько целей в одном анализе, и какие имеются показания для его проведения? Попробуем разобраться.

Что такое анализ крови, проводимый методом ИФА

Это лабораторное исследование, которое позволяет определять наличие специфических антител (защитных факторов крови белковой природы) к определенным антигенам (болезнетворным агентам). Среди антител первостепенное значение имеют иммуноглобулины, которые могут существовать в виде иммунокомплексов.

Иммуноглобулины вырабатываются вследствие сложных нейрогуморальных реакций иммунитета человека, возникающих как ответная реакция на внедрение чужеродных антигенов. На каждый вид болезнетворного агента вырабатываются свои специфические антитела. Действуют они путем «связывания» антигена или патологического микроорганизма, образую комплексное соединение «антиген-антитело» с последующей нейтрализацией, ферментативным лизисом, реакциями фагоцитоза и выводом из организма.

Обратите внимание: именно по наличию определенных комплексов методом ИФА определяется вид возбудителя или имеющегося у больного вредного вещества.

Узнать базовые принципы функционирования иммунитет человека вы сможете, посмотрев данный видео обзор:

Какие бывают иммуноглобулины

Открыто и изучено 5 основных классов иммуноглобулинов – IgА, IgM, IgG, IgD, IgE. роль остальных еще до конца не выяснена и она находятся в стадии научного исследования.

Обратите внимание: наиболее важное в практической медицине значение имеют иммуноглобулины классов – А, М и G. Информативность определения основана на разных временных промежутках их появления, максимума и исчезновения.

Рассмотрим этот вопрос более детально.

Основная задача иммуноглобулина А (IgA) заключается в защитных функциях слизистых оболочек дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и мочевыделительной системы. При остром начале заболевания выявить их невозможно. Появляются эти защитные комплексы лишь со 2 недели начала заболевания, иногда позже. Основная масса иммуноглобулина А сосредоточена в слизистых тканях. Ориентировочно около 80%. Остальные антитела циркулируют в крови. Основная функция – обезвреживание и уничтожение микроорганизмов. После стихания острых проявлений заболевания количество этих иммуноглобулинов начинает уменьшаться и полностью уходит на сроке до 8 недель после начала болезни. Если IgA обнаруживаются в более поздние сроки, то это свидетельствует о хронизации процесса.

Главными и первыми маркерами острой фазы развивающейся патологии являются иммуноглобулины класса М (IgM). Обнаруживаются они к 5 суткам начала недомогания. Определить их наличие в крови можно около 6 недель. Затем они начинают быстро исчезать.

Остаточный иммунный ответ характеризует наличие в крови иммуноглобулинов класса G (IgG). Появление этих факторов в крови обнаруживается примерно через месяц после начала болезни. В дальнейшем они могут определяться в течение многих месяцев, лет и даже всю жизнь, выполняя защитную функцию от возврата (рецидива) болезни, а в некоторых случаях делая невозможным вторичное развитие патологии. Если же количество иммуноглобулина G начало вновь расти, то можно подозревать повторное заражение. Подобный вывод можно сделать путем проведения двух-трех проб, сделанных с промежутком в 2 недели.

Иммуноглобулин Е (IgE) используется в практике паразитологии.

Иммуноглобулин D (IgD) располагается на B-лимфоцитах, находится в небольшой концентрации у здоровых людей. После 10 года жизни достигает максимальных значений. Количество иммуноглобулина D увеличивается при беременности, у больных системными заболеваниями соединительной ткани, бронхиальной астмой, заболеваниями, вызванные иммунодефицитным состоянием.

Показания к назначению иммуноферментного анализа крови

Определение антител к наличию в организме болезнетворных микробов, вызывающих:

  • сифилис;
  • трихомоноз;
  • уреаплазмоз и микоплазмоз.

Имеется рост количества иммуноглобулинов и при глистных инвазиях.

Диагностика проводится для обнаружения:

  • герпетических заболеваний;
  • группы вирусных гепатитов;
  • вируса Эпштейна-Барра;
  • цитомегоаловируса.

При помощи ИФА можно определять наличие антител к 600 видов аллергенов, обнаруживать состояние иммунодефицита, проводить комплексное обследование перед трансплантологическими операциями, проводить комплексный анализ на предмет эффективности лечения.

ИФА является дополнительным методом обнаружения онкологических клеток.

Как проводится ИФА крови

Для иммуноферментного анализа в большинстве случаев используется кровь пациентов, иногда производят забор ткани стекловидного тела, жидкости спинномозгового канала, околоплодных вод.

Кровь набирают через инъекционную иглу в шприц из локтевой вены. Исследование проводят натощак. Следует помнить, что прием некоторых медицинских препаратов может влиять на результат анализа. Перед сдачей крови необходимо воздержаться от курения, приема алкоголя. Исказить результаты может прием наркотических веществ.

В случае отрицательных значений иммуноглобулинов IgM, IgG, IgA можно говорить об отсутствии заболевания или его начальной фазе, также результат с минусами возможен при полном выздоровлении по прошествии значительного количества времени.

Если IgA и IgM не обнаружены, а IgG проявляется положительно, то по всей вероятности речь идет о сформированном иммунитете после инфекционного заболевания, или после прививки.

В случае высокого титра IgM при отрицательных значениях IgG, IgA можно делать вывод о наличии остро протекающего инфекционного заболевания.

Одновременные положительные значения результатов иммуноглобулинов – IgA, IgM, IgG характерны для острой фазы рецидива имеющегося хронического заболевания.

Для хронической инфекции, находящейся в фазе стихания процесса (ремиссии) ИФА показывает отрицательные значения иммуноглобулина M (IgM), при этом результат иммуноглобулинов G (IgG) и A (IgA) будет положительным.

Преимущества метода иммуноферментного анализа крови

Главными достоинствами метода ИФА являются:

  • невысокая себестоимость анализа;
  • диагностическая специфичность, точность;
  • динамический контроль (повтор анализа для определения эффективности лечения и стадий заболевания);
  • возможность проведения массовых обследований в очагах инфекции;
  • скорость получения результата;
  • относительная простота анализа;
  • возможность использования информационных технологий в обработке;
  • безопасность и безболезненность для пациента.

Есть ли недостатки у ИФА крови?

Главным отрицательным моментом исследования является возможность получения ложноотрицательных и ложноположительных данных. Причиной недоразумений могут стать технические недочеты, прием медикаментов, который может исказить картину.

Обратите внимание: фальсифицировать результат анализа может нарушение обменных процессов в организме. Осторожность в выводах надо соблюдать при сочетании нескольких хронических процессов у больного.

Иммуноферментный анализ крови в паразитологии

Возможность применения ИФА в диагностике паразитарных заболеваний определяется специфическим иммуноглобулином E (IgE), который имеет тенденцию к повышению именно при этой группе заболеваний. Кроме того, иммуноглобулин Е является маркером атопических реакций связанных с аллергическими процессами. В крови он находится в незначительных количествах. Основная его локализация – слизистые оболочки, базофилы, маркофаги. Главная функция этого белкового комплекса заключается в защите слизистых оболочек организма. Но в тоже время он является участником иммунных реакций, направленных против паразитов. Активацией IgE «заведуют» эозинофилы и макрофаги. Это важный факт в сопоставлении данных анализа при установлении диагноза болезни.

ИФА применяется для обнаружения:

  • круглых гельминтов (аскарид, остриц);
  • острой и хронической формы описторхоза;
  • трихинеллеза;
  • наличия лямблий (как дополнительный анализ);
  • форм лейшманиоза;
  • амебиаза;
  • содержания токсоплазм;

Важно: иммуноглобулины вырабатываются в организме в качестве антител к определенным антигенам. Поэтому даже при самой высокой специфичности анализа не исключаются погрешности в точности. При паразитарных заболеваниях процент вероятности составляет около 90%.

В заключение необходимо отметить, что современная иммунология постоянно находится в стадии развития, поиска новых методов диагностики и лечения заболеваний.

Степаненко Владимир, хирург

Источник: https://okeydoc.ru/analiz-krovi-po-metodu-ifa/